Определяне на изоелектричната точка
Молекулите на протеин са свободни карбоксилни и амино групи, така те могат да бъдат разделени като киселина и като база т. Е. са амфотерни електролити.
Алкалният разтвор се потиска от дисоциацията на аминовите групи на протеини отрицателно заредени молекула и се държи като аниони.
В кисела среда, което води до потискане на дисоциация на карбоксилните групи, положително заредени протеини, т.е. Те са катиони.
В определен киселинност на разтвора, който се нарича изоелектричната точка (ИЕП) в молекулата на протеин се определя равни положителни и отрицателни заряди, става електронеутрален. Позицията на изоелектричната точка зависи от съдържанието и естеството на основни и киселинни групи в молекулата на протеин. По-голямата част от растителни протеини ИЕП е в слабо кисела среда.
Изоелектричната точка на протеина има ниска разтворимост и лесно се утаява под влияния, които намаляват хидратиране на неговите молекули (с добавяне на органични разтворители или соли). Когато тази протеинови молекули обединяват, формирайки по-големите частици и да падне от разтвора като утайка.
1. Получаване на протеинови разтвори. От получените протеинови препарати, като проба от 0.25 гр в колби се излива в 5 мл 0.5N. разтвор SN3SOONa и се разтваря при нагряване на водна баня. След това обемът се довежда с вода до 25 мл.
Получените разтвори бяха използвани за определяне на изоелектричната точка на протеините. За сравнение, ние също използва яйчен протеин се разрежда 10-кратно с вода и се филтрува през два слоя марля.
2. Определение на IEP. На 8 тръби номерирани с пипета 1 мл протеинов разтвор се излива вода и 0,01 N. или 0.1N. разтвор на оцетна киселина в kolichestvah.Zatem излива във всяка епруветка 2 мл ацетон или алкохол, съдържанието се разбърква и се оставя в продължение на 30-40 минути при стайна температура. При рН при или близо до изоелектричната протеин на, разтворът става мътен и преципитати. Таблица отбележи, интензивността на утаяване или липсата на такава. Въз основа на тези резултати, ние заключаваме, за състоянието на изоелектричната точка на анализирани протеини.
Материали и оборудване: 0.5N. Разтвор на натриев ацетат (68.5 грама SN3SOONa.3N2O в 1 L), 0.1N. разтвор CH3COOH (6 мл ледена оцетна киселина се разрежда с вода до един литър) от 0,01 N. разтвор CH3COOH приготвен чрез разреждане 0,1 N. разтвор CH3COOH 10 пъти, етанол, ацетон, яйчен протеин, семена на зърнени култури и бобови растения, или изолирани от тези протеини, флакони, мерителна колба от 25 мл, стативи.
Свързани новини: