Изоелектричната точка

Изоелектричната точка (обозначенията: ПИ ИЕП) - стойността на рН (рН) среда, с рояк заряд на молекулите на амфотерни електролити (амфолити), разположени в тази среда, е равна на нула; Той е един от основните параметри, определящи свойствата на електрохимически амфолити, например, аминокиселини и протеини, клетки и тъкани. Изследване I. т. Biol обекти, произход обещава по отношение на диагностика на редица заболявания, т. К. В различни заболявания настъпи промяна в рН стойности, които са I. т. На еритроцитите и други клетки, както и кръвната плазма протеини.

Терминът "изоелектричната точка" се отнася не само за мобилността на частиците (молекули, колоидни частици, суспензии и емулсии на частици), но също така и към фиксираните структурни елементи на различни видове системи в контакт с воден разтвор на р-рами. Напр. можем да говорим за I. т. повърхността на мускулните фибрилите на, Biol, мембрани, и така нататък. п.

За първи път е въведена тази концепция през 1899 от Hardy (W. Hardy), който установява, че в киселина р-ма протеинови частици се движат в електрическо поле към катода и следователно носят положителни заряди, и алкално-ма р - към анода , т. е. отрицателно зареден. Състояние, в ром протеинови електрически неутрални частици, се нарича изоелектрично състояние, и съответната стойност на рН на средата - I. T.

Теория изоелектрично държавни амфолити първо е разработена от Michaelis (L. Michaelis) през 1918 г. и модифицирани Bjerrum (Н. Bjerrum) през 1923 г. Съгласно Bjerrum теория амфолити молекула (вж.) В изоелектричната състояние почти напълно отделени и са в р- D под формата на биполярни йони за протеини, които могат да бъдат представени чрез формула схематичен + NH3RCOO-, където R - полипептидна верига. Биполярно I. т йон в. Е равен на броя на елементарните положителни и отрицателни заряди и следователно като цяло е електрически неутрални частици. При добавяне към р-Ру-да силни водородни йони, образувани комбинират с неговите СОО- групи и частици протеин стане положително заредена: + NH3 RCOOH. При добавяне към р-пг силни основи от + NH3 групи се отделя водородни йони, които се свързват с хидроксилните йони на алкален, образуващи водни молекули, и частици протеин стане отрицателно заредени: NH2 RCOO-.

I. т. За да се разграничава от isoionic точка (IIT) протеин, т.е.. Е. PH стойност на такава среда, за к-номер на водородните йони от киселинните разцепващи се групи на протеиновите молекули, е равен на броя на водородните йони, се свързва с основни групи. Стойностите на I. м. IIT съвпадат само в случаите, когато е чист протеин във воден р-D, който не съдържа никакви други йони, освен водород и хидроксил. Солта на R-ма числени стойности на протеинови го I. т. А IIT различни, т. К. A зареждане на протеиновите частици се определя не само йонни групи на протеиновите частици, но и от йони сол, които могат да адсорбират протеин.

количество I. м. В зависимост от относителното съдържание на киселинни и основни групи в молекулата на протеин, както и на степента на дисоциационните константи на тези групи. С увеличаване на съотношението на броя на киселинни групи на броя на основните групи I. т стойност. Намалява и с увеличаване на дисоциационните константи на съставките и намаляването на киселинните групи на дисоциационните константи се увеличава. Денатуриране на протеини от I. т. Издига. I. т. Протеинът е по същество независима от неговата концентрация в р-RE.

Обект амфолити в изоелектричната състояние различно от техните свойства при рН, не е от значение I. т. По този начин, напр. протеини в Н. т. не притежават електрофоретичната подвижност (cm. електрофореза), имат минимална хидратация, разтворимост и стабилност (който е широко използван в протеин фракциониране чрез изсолване), вискозитет, осмотичното налягане, електропроводимост, степента на подуване на специфично оптично въртене. скорост желиране и осоляване в I. т. максимум. Подобни свойства в I. т. Притежава клетка протоплазма, основа ято съдържа протеинов вещество. Знанието I. т. Протеини и други полимерни амфолити съществено значение за разработването на методи за тяхното разделяне и пречистване.

Най-прекият и точен метод за определяне I. т. Протеинът е измерване на електрофоретичната подвижност в р-буфер РСБ на с последователно променящите се стойности на рН. Където два съседни стойности, определени рН, при една от които частиците на протеин се преместват към анода, а другият - към катода. Средните стойности на две на наблюдаваната рН се определя да бъде I. т.

От 2-та половина на 20 век. Измерване I. т. На различните протеини широко използван метод на изоелектрично фокусиране (см.), Използвайки синтетични амфолити носители. Индиректни, по-малко точни методи за определяне I. т. Въз основа на измерване на разтворимостта, набъбването, праг изсолване и други свойства, характеризиращ се с изоелектрични държавни крайности. За да се определи I. т. Тъкани, клетки и техните компоненти са широко използвани метод Pishinger (A. Pischinger), въз основа на измерване на цвят интензивност на изпитвания обект основни и кисели багрила последователно промяна в рН на средата в рояк се изследват обект. интензивност криви цвят промяна пресичат в рН, съответстваща I. т.

PIT се определя чрез прибавяне на воден протеин г-ра чист протеин на р-рамки на силното-ви (или алкален) с постепенно различни стойности на рН и след това измерване на преминаването срещащи се при това рН. Стойност на рН P PA, за к-равна на нула, тази промяна съответства ITI протеин.

Библиография: Ashmarin П. и д-р Protein Chemistry, част. 1, СИ. 968 I; Протеини, йод, червени. Н. Neurath и К. Бейли Lane. от английски език. Vol. 2, стр. . 475 и сътр М. 1956 док. D и и р о и р в Е. химия и функция на протеини, Acad. от английски език. М. 1965 док. М и от ров-PV Физични и химични свойства на клетки и методи за тяхното изследване. L. 1948 док. P С до N и GI Izoelektri-кал предмет клетки и техните промени в нормалното развитие и патологията, Phys. sovr, Biol. т. двадесет и две инч 2 (5), стр. 247 1946 г., док.